鄭州澤銘科技產品——對蜂蜜中抗生素殘留量的檢測技術方法

1 主題內容與適用范圍
本標準規定了用微生物管碟法測定蜂蜜中四環素族抗生素殘留量的方法。
本標準適用于天然或加工蜂蜜中四環素族抗生素殘留量的測定。
2 原理
樣品中四環素族抗生素經Mcllvaine緩沖液提取后，用SEP-PAK C18柱純化四環素族三種抗生素四環素、土霉素及金霉素利用薄層層析生物檢測法進行分離和定性；以蠟樣芽胞桿菌為試驗菌株，出微生物管碟法進行定量檢測。
3 試劑
所用試劑均為分析純，水為蒸餾水。
3.1 Mcllvaine緩沖液（PH 4）：稱取磷酸氫二鈉（Na2HPO4·12H2O）27.6g、檸檬酸（C6H8O7·H2O）12.9g、乙二胺四乙酸二鈉鹽37.2g，用水溶解后稀釋并定容1000mL。
3.2 0.1mol/L磷酸鹽緩沖液（pH4.5）：稱取磷酸氫二鉀13.6g，用水溶解后稀釋并定容1000mL，115℃滅菌30min，置4℃冰箱中保存。
3.3 5%乙二胺四乙酸二鈉鹽水溶液。
3.4 Waters SEP－PAK C18柱（或產PT－C18柱）：用時先經10mL甲醇濾過活化，再用10mL蒸餾水置換，然后用10mL 5%乙二胺四乙酸二鈉鹽流過。
3.5 標準抗生素：四環素、土霉素、金霉素標準品由衛生部藥品生物制品檢定所提供。
3.6 抗生素標準原液和稀釋液
3.6.1 抗生素標準原液配制：稱取四環素、土霉素、金霉素標準品適量（按效價進行換算），用0.01mol/L鹽酸溶解并定容1000?g/mL，置4℃冰箱中（可使用7天）。
3.6.2 抗生素標準稀釋液配制：臨用前取上述原液按1∶0.8劑距用0.1mol/L磷酸鹽緩沖液逐步稀釋配制成標準稀釋液。制備四環素、土霉素標準曲線的標準濃度為0.16，0.21，0.26，0.32，0.40，0.50?g/mL，參考濃度為0.25?g/mL；制備金霉素標準曲線的標準濃度為0.033，0.041，0.051.0.064，0.08，0.10?g/mL，參考濃度為0.05?g/mL。定性試驗用標準液濃度四環素、土霉素為2?g/mL，金霉素為1?g/mL。
3.7 展開劑：正丁醇醋酸－水（4∶1∶5）。

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